Рестриктазы [Рестрикционные эндонуклеазы]

Рестриктаза (от англ. restriction — резать) или эндонуклеаза рестрикции — фермент, разрезающий молекулу ДНК на отрезки по специфической последовательности нуклеотидов.

Если в какую-нибудь клетку микроорганизма извне внедряется чужеродный генетический мате­риал, то он немедленно расщепляется под действием фермента нуклеазы.

Ферменты, разделяющие молекулу ДНК на мелкие части, назы­ваются рестрикционными (разрывающими) эндонуклеазами. Каждая рестриктаза распознает четыре или более пары специфических последовательностей нуклеотидов, связывается с ними и разрывает молекулу ДНК. Отдельные рестриктазы разрезают двойную цепь ДНК на две части подобно ножницам.

Вместе с тем существуют также рестриктазы, которые разрывают двойную цепь молекулы ДНК с образованием «липких» концов. К их числу относятся рестриктазы Eco RI, Bam HI (Эко-эр-один, бам-аш-один), приведённые в таблице. Видно, что эти рестриктазы по своим функциям подобны транспозазам. Поэтому, используя «липкие» концы, образованные этими рестриктазами, легче удаётся соединить отрезки разных ДНК между собой. Благодаря этим свойствам такие рестриктазы широко используются в генной инженерии. К настоящему времени получено в чистом виде и изучено более 500 различных рестриктаз.

Методы выделения высокомолекулярной ДНК из различных организмов в чистом виде, разделения её соответствующей рестриктазой на отрезки с образованием «липких» концов и разделения образовавшихся отрезков методом электрофореза, выбора из различных отрезков тех, которые необходимы, и соединения их между собой с помощью фермента лигазы в заданном порядке являются самыми простыми и основными методами генной инженерии.

Таблица. Отдельные рестриктазы, а также распознаваемые и разрезаемые ими нуклеотидные последовательности

Микроорганизм	Сокращённое название	Нуклеотидная последовательность 5’— 3‘, 3‘— 5‘
Bacillus amulolique faciens H	Bam HI	G‘GATCC Материал с сайта http://wiki-what.com CCT AG‘G
Escherichia coli RY13	Eco RI	G‘AATTC CTTAA‘G
Haemophilus aegyptius	Hae III	GG‘CC CC‘GG